宿主细胞残留DNA提取及检测


当前,各类生物制品已被广泛应用于预防和治疗疾病,尤其是新冠疫情爆发以来,在治疗药物筛选和疫苗研发等方面更是加大攻关力度。生物制品中的疫苗、抗体药、重组蛋白等产品是在连续传代的菌种株/细胞株上进行表达和生产,虽然经过严格的纯化工艺,但产品中仍有可能存在宿主细胞残留的DNA片段,而这些残留DNA不仅会降低生物制品的有效性,还存在传染性和致瘤性的危险。因此从生物制品有效性需求和安全角度考虑,宿主细胞残留DNA是各项质控标准的重中之重。

各国药品监管机构对宿主细胞残留DNA的含量均有着严格的限度控制,也提供了多种经典的检测方法。建立合适的宿主细胞残留DNA检测方法对于监测生物制品的安全性和质量可控性至关重要。


宿主细胞残留DNA的限定标准

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宿主细胞残留DNA定量检测方法

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其中,qPCR法因其具有高灵敏度、特异性、准确性和耐用性等特点,现已成为生物制品工艺研究和产品质量控制的首选检测方法。

为解决宿主残留DNA引起的生物制品安全性问题,全式金自主研发了2款宿主细胞残留DNA提取试剂盒以及3款宿主细胞(Vero、CHO、E.coli)残留DNA的qPCR法检测试剂盒,可快速高效提取并检测生物制品中宿主DNA的残留量。


宿主细胞残留DNA提取

1. MagicPure® Host Cell Residual DNA Kit (EH201)

2. MagicPure® 32 Host Cell Residual DNA Kit (EH201-32)

产品特点

★ 适用于从≤200 μl生物制品样本中提取宿主细胞(CHO、Vero、NSO、MDCK等)的微量DNA片段;

★ 残留DNA回收率高;

★ 操作简单,无需离心,提取速度快;

★ 提取量高,纯度高;

★ 可搭配高通量磁棒式核酸提取仪,其中EH201-32配套32通道自动化核酸提取仪使用。

实验数据

分别以100-0.001 pg/μl(10倍梯度稀释)浓度的Vero碎片化DNA样品为模板,使用TransGen和Company S产品进行宿主细胞残留DNA提取回收并测试。结果表明,TransGen产品具有更高的DNA回收率。


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3. TS-32 自动核酸提取仪 (TS-32) 

★ 触屏操控,自由编程;

★ 自控系统,安全智能;

★ 精确控制,高效控温;

★ 紫外消毒,杜绝污染;

★ 结果稳定,高效提取;

★ 试剂开放,兼容性好。


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宿主细胞残留DNA检测

1.PerfectStart® Vero DNA Quantification Kit (DH111)

2.PerfectStart® CHO DNA Quantification Kit (DH121)

3.PerfectStart® E.coli DNA Quantification Kit (DH131)

产品特点

★ 3种抗体封闭,特异性高,灵敏度高,扩增效率高,线性范围广;

★ 特殊优化的qPCR反应缓冲液,可提供更高的延伸速度,灵敏度和特异性;

★ 使用UDG酶和dUTP,有效防止PCR产物的污染,数据准确;

★ 专属性强:不同细胞系之间无交叉反应;

★ 准确性高:DNA标准品检测值偏差<5%;

★ 耐用性强:DNA碎片化不会对检测结果造成影响,碎片化DNA回收率高;可适配多种qPCR仪器;

★ 稳定性高:经反复冻融7次或4℃、室温以及37℃放置8天后,产品性能均无影响。

实验数据

线性范围广

以梯度稀释的宿主细胞DNA标准品为模板,使用TransGen产品进行宿主细胞残留DNA定量检测。结果表明,TransGen产品具有宽广的线性范围。


DH111-Vero线性范围为:3 fg/μl-300 pg/μl,R2=1.000,扩增效率为 102.3%,各浓度检测值 CV<15%。

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DH121-CHO线性范围为:3 fg/μl-300 pg/μl,R2=1.000,扩增效率为 97.6%,各浓度检测值 CV<15%。

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DH131-E.coli线性范围为:50 fg/μl-500 pg/μl,R2=0.999,扩增效率为 98.4%,各浓度检测值 CV<15%。

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专属性强

使用生物制品生产中常用的工程细胞基因组DNA对Vero、CHO、E.coli检测试剂进行干扰。结果表明,干扰组与对照组重合,未见干扰。


DH111-Vero

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DH121-CHO

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DH131-E.coli

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耐用性强

将超声处理后的碎片化DNA(Vero、CHO)按照300 pg/μl、30 pg/μl、3 pg/μl、300 fg/μl浓度梯度稀释,并进行检测。结果表明,DNA的碎片化不会对检测结果造成影响。


 DH111-Vero                                                               DH121-CHO

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将超声处理后的碎片化DNA(E.coli)按照500 pg/μl、50 pg/μl、5 pg/μl、500 fg/μl、50 fg/μl浓度梯度稀释,并进行检测。结果表明,DNA的碎片化不会对检测结果造成影响。


DH131-E.coli

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